P2实验室即二级生物安全实验室，相当于BSL-2实验室。一、主要技术指标的确定

BLS-2 实验室主要用于初级卫生服务、诊断和研究，其实验对象的危害等级为Ⅱ级（中等个体危害，有限群体危害），具体定义为“能引起人类 或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病源体。实验室感染不导致严重疾病，具备有效治疗和 预防措施，并且传播风险有限”。据此，待颁布的国标《生物安全实验室建筑技术规范对 BLS-2实验室规定了以下技术指标(静态):

1、洁净度：无要求

2、最小换气次数：可开窗通风

3、与室外方向相邻相通房间的压差：无要求

4、温度℃：18~27

5、相对湿度％：30~70

6、噪声dB(A)：≤60

7、最低照度lx：300

*上诉指标是建立BLS-2实验室的最低要求，建设者可根据实际需要

适当提高相应指标，如洁净度、压差等。

二．建筑、结构和装修要求

现在BLS-2实验室大多数是在原有建筑物内进行改建，不同于新建的BLS-2实验室（国标中，要求新建BLS-2实验室宜离开公共场所一段距离），在与相邻其他房间之间，存在着一个相对隔离问题。所以在原有建筑物中改建BLS-2实验室，应重点注意以下几个问题。

1、在共用建筑物中建BLS-2实验室，应设可自动关闭的带锁的门，必要时，可设立缓冲区域，如缓冲间等。

2 、如果没有机械通风系统，应有窗户进行自然通风，并应有防虫纱窗。（一般情况下，应有机械通风系统，否则，温湿度指标难以保证） 。

3、应有防昆虫、鼠等动物进入和外逃的措施。

三．空调、通风和净化

为满足BLS-2 实验室温湿度要求，宜配备机械空调通风系统，有特殊要求的可增设设计要求，如增设净化要求并按净化要求进行送回（排）风系统设计 等。这方面，应重点处理好以下几个问题：

1、可以采用带循环风的空调系统。如果涉及化学溶媒，感染性材料操作和动物实验，则应采用全排风系统。

2、生物安全柜与排风系统连接

I级 排风比例100%，密闭连接。

II级 A型 排风比例30%，可排到房间或设置局部排风罩。

B1型 排风比例70%，密闭连接。

B2型 排风比例100%，密闭连接。

3 、实验室内各种设备的位置应有利于气流由“清洁”空间向“污染”空间流动，最大限度减少室内回流与漏流（生物安全柜一般应置于室 内气流最下游，即最远离送风口处）。

*生物安全柜的排风不能代替室内排风。

四．排水

含菌污水应经高温高压消毒或化学消毒后排放至市政污水排放公用系统。

五．电气设置

1、应设专用配电箱。

2、电源宜设置漏电检测报警装置。

3、应有可靠的接电系统，其接地电阻不宜大于1Ω。

4、实验室入口应有实验室工作状态的文字式灯光讯号显示。

5、应设紧急发光疏散指示标志。

六．消防

建筑物耐火等级不低于二级。

七．应配备的工艺设备

1、 生物安全柜

（1）产生微生物气溶胶或出现溅出的操作，可使用I级生物安全柜。

（2）处理感性材料，应使用II级生物安全柜；

（3）处理化学致癌剂、放射性物质和挥发性溶媒，应使用Ⅱ-B级生物安全柜。

2、 高温高压灭菌消毒柜。

3、 洗眼器，必要时应设置应急喷淋装置。

*超净工作台不属于生物安全柜，不能用于生物安全操作。

BLS-2实验室是用于初步的生物安全实验，国标明确了相应要求。建立BLS-2实验室应根据国标、在保证安全的前提下确定建设目标，建立的实验室应该是安全的、经济的实验室。

P2级实验室一般规范　
一、隔离的设备

1) 需设置生物安全操作装置（第一级或第二级），且要做定期检查。

2) 为了处理重组体，而使用容易产生气雾的磨碎机、冷冻干燥器、超音波细胞打碎机及离心机等仪器时，需把这些仪器放置在安全操作装置中。但若机器已经有防止气雾外泄的装置，则不在此限。

3) 实验室需具备处理污染物及废弃物灭菌用之高压灭菌器。

二、实验实施要项

1) 进行实验时，需关闭实验室的门窗。

2) 每天实验结束之后一定要灭菌实验台及安全操作装置。如实验中发生污染，需立即加以灭菌。

3) 与实验有关之生物材料之废弃物，在丢弃前需做灭菌处理。被污染的器具需先经高压灭菌后，再清洗使用或丢弃。

4) 不得用口做吸量操作。

5) 实验室内禁止饮食、吸烟及保存食物。

6) 操作重组体时需戴手套以防污染，操作完毕后及离开实验室前需洗手。

7) 在所有的操作中，应尽量避免产生气雾（例如，把烧热的接种用白金环及接种针插入培养基时，若发生大量气雾，就可能造成污染）。亦应避免将吸管或针筒内之液体用力射出。

8) 要从实验室搬离被污染物品时，必需将其放入坚固且不外漏的容器，并在实验室内密封之后，才可运出。

9) 防除实验室的非实验用生物，如昆虫及鼠类等。

10) 若有其它方法可用，应避免使用针头。

11) 实验室内，要穿着实验衣，离开前要脱掉。

12) 禁止对实验性质不了解的人进入实验室。

13) 实验进行中，要在实验室之入口，标示「P2级实验室」，并挂上「P2级实验进行中」的标示。而且保存重组体之冰箱及冷冻库也要做同样的标示。

14) 实验室要经常清理，保持清洁，不得放置与实验无关的物品。

15) 安全操作装置内的HEPA过滤器，在更换前、定期检查时及实验内容变更时，需密封安全操作装置，每立方公尺用10公克的甲醛熏蒸1小时，去除污染。

16) 若在此级实验室内同时进行P1级的实验时，需明确划分实验区域，小心进行操作。

17) 需遵守计划主持人所规定之其它事项。

动物设施——二级生物安全水平
二级生物安全水平的动物设施适用于专门接种了危险度2 级微生物的动物，需要进行下列安
全防护：
1、必须符合一级生物安全水平动物设施的所有要求。
2、在门及其他适宜的地方张贴生物危害警告标志（见图1）。
3、设施的设计必须易于清洁和管理。
4、门必须向内开，并可以自动关闭。
5、要有适宜的温度、通风和照明。
6、如果采用机械通风，则气流的方向必须向内。排出的空气要排到室外，不得在建筑物内
循环使用。
7、授权人员方可进入。
8、仅接纳实验用动物。
9、应制订节肢动物和啮齿类动物的控制方案。
10、如有窗户，必须是安全、抗击碎的。如果窗户可以打开，则必须安装防节肢动物的纱网。
11、使用后，工作表面应用有效的消毒剂来清除污染（见第14 章）。
12、可能产生气溶胶的工作必须使用生物安全柜（Ⅰ级或Ⅱ级）或隔离箱，隔离箱要带有专
用的供气和经HEPA 过滤的排气装置。
13、动物设施的现场或附近备有高压灭菌器。
14、清理动物的垫料时必须尽量减少气溶胶和灰尘的产生。
15、所有废料和垫料在丢弃前必须先清除污染。
16、尽可能限制锐利器具的使用。锐器应始终收集在带盖的防刺破容器中，并按感染性物质
处理。
17、进行高压灭菌、焚烧的物品应装在密闭容器中安全运输。
18、动物笼具在使用后必须清除污染。
19、动物尸体必须焚烧。
20、在设施内必须穿着防护服和其他装备，离去时脱下。
21、必须有洗手设施。人员离开动物设施前必须洗手。
22、如发生伤害，无论程度轻重，必须进行适当的治疗，且要报告并记录。
23、禁止在设施内进食、饮水、吸烟和化妆。
24、所有人员必须接受适当的培训。

美国疾病控制中心实验室生物安全级别标准
本标准概括了传染性微生物和实验动物工作中的四个生物安全级别所包括的主要要素。
根据给个人、环境、社会提供的保护情况，确定级别。
生物安全一级(BSL-1)
BSL-1适合于非常熟悉的病源，该病源不会经常引发健康成人疾病，对实验人员和环境潜在危险小。实验室没有必要和建筑物中的一般行走区分开。一般按照标准的微生物操作，在开放的实验台面上开展工作。不要求、一般也不使用特殊的遏制设备和设施。实验人员在实验程序方面受过特殊训练，由受过微生物学或相关科学一般训练的科学工作者监督实验。
以下标准及特殊操作、安全设备及设施和BSL-1病源有关：
一、标准微生物操作：
1、在进行有关培养物及样品实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。
2、进行活体处理后，实验人员要洗手；离开实验室前脱手套。
3、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。不允许在工作区存放食物和日常生活用品。在实验室中，戴隐型眼镜的人，也需戴口罩或面罩。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。
4、不能用嘴移液，只能用机械装置移液。
5、制定锐器安全使用规范。
6、所有的操作过程应尽量细心，避免产生溅出和气溶胶。
7、至少一天一次、活体溅出时，都应进行台面消毒。
8、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室，其包装应符合有关地方、州、联邦法规。
9、当存在传染源时，应在实验室入口处贴生物危险标志，并显示以下信息：实验中的病源名称、研究者姓名及电话号码。
10、实施控制昆虫和龋齿动物的程序
二、特殊操作：无
三、安全设备(第一道屏障)
1、和BSL-1相关的病源，其操作一般不需要生物安全柜之类的特殊遏制装置或设备。
2、建议穿实验服、大褂、制服，避免污染和衣服上的尘土。
3、若手上皮肤有伤或出皮疹，应戴手套。
4、操作过程中，估计会出现微生物或危险物溅出时，应戴保护眼具。
四、实验室设施(第二道屏障)
1、实验室应设置门以控制进入。
2、每个实验室有一个洗手池。
3、实验室设计要便于清洗，实验室内不适宜用地毯。
4、实验台表面应能防水、耐热、耐有机溶剂、耐酸碱和耐用于工作台面及设施消毒的其他化学物质。
5、实验室的实验台应能承受预期的重量并符合使用。实验台、安全柜以及设备之间的空间应便于打扫。
6、如果实验室有对着外面的窗子，应装防止苍蝇的窗纱。
生物安全二级(BSL-2)
BSL-2与BSL-1类似，适合于对人和环境有中度潜在危险的病源，与BSL-1的区别在于：(1)实验人员均接受过病源处理方面的特殊培训，并由有资格的科学工作者指导；(2)进行实验时，限制进入实验室；(3)对于污染的锐器，要特别注意；(4)某些可能产生传染性气溶胶或飞溅物的过程。应在生物安全柜中或其它物理遏制设备中进行。
以下的标准及特殊操作、安全设备及设施和BSL-2病源有关：
一、标准微生物操作：
1、实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。
2、进行活体处理后，实验人员要洗手；离开实验空前脱手套。
3、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。
4、不能用嘴移液，只能用机械装置移液。
5、制定锐器安全使用规范。
6、所有的操作过程应尽量细心，避免产生溅出和气溶胶。
7、实验完毕、下班前、活体溅出或溢出时，都应使用对病源有效的消毒剂进行台面消毒。
8、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关地方、州、联邦法规。
9、实施控制昆虫和龋齿动物的程序(参见附录G)(另发)
二、特殊操作：
1、在开展有关传染病源工作时，实验室主任应禁止或限制人员进入实验室。一般情况下，易感人员或感染后会出现严重后果的人员，不允许进入实验室或动物房，例如，患有免疫缺陷或免疫抑制的人，其被感染的危险性增加。实验室主任对每种情况的估计和决定谁能进入实验室或动物房工作，负有最终责任。
2、实验室主任应制定规章和程序，只有告知潜在风险并符合进入实验室特殊要求(如，经过免疫接种)的人，才能进入实验室。
3、存在外源性病源时，实验室入口处应贴有生物危险标志，并显示以下信息：有关病源、生物安全级别、免疫接种要求、研究人员姓名、电话号码、在实验室中必须佩带的个人防护设施、出实验室所要求的程序。
4、实验室人员接受适当的、和实验室中处理或将要处理的病源有关的免疫接种或测试(如，乙肝免疫接种或TB皮试)。
5、根据所处理的病源，适当时，收集和储存适合于实验室人员和有风险人员使用的基本血清样品。根据所处理病源或设施的功能，应定期收集其他血清样品。
6、实验室主任为实验室人员特别制定的标准操作程序或生物安全手册中，应包括生物安全程序。对于有特殊风险的人员，要求阅读并在工作及程序上遵照执行。
7、实验室主任保证实验及其辅助人员接受适当的培训，包括和工作有关的可能存在的风险、防止暴露的必要措施和暴露评估程序。当程序必需改变时，有关人员必须每年更新知识，接受附加培训。
8、对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻片、加样器、毛细管、手术刀。
a．针和注射器或其他锐器应限制在实验室内，类似灌肠、静脉切开放血、或实验动物液体吸出等，可以用其他器具的，就不要用锐器。可能时，用塑料器具代替玻璃器具。b.注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器(即注射器和针头是一体的)。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。
c．适当时，使用带针头套的注射器、无针头的系统和其他安全设施。
d．打碎的玻璃器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、器、碎玻璃的容器在到掉前，应按照地方、州、联邦的规定进行消毒。
9．培养物、组织，体液标本，或具有潜在传染性的废物要放入带盖的容器中，以防在收集、处理、储存、运输或装卸过程中泄露。
10．按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照地方、州或联邦的规定消毒；在离开设施转移前，要按照地方、州或联邦的规定打包运输。
11．溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。12．和实验无关的动物不允许进入实验室。
三、安全设备(第一道屏障)
1、任何时候都要使用正确保养的生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或物理遏制装置。
a．确定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，包括离心、研磨、匀浆、剧烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源的容器(容器内部的压力可能与大气压不一致)、动物鼻孔接种、从动物或胚胎卵采集感染组织。
b．涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。
2、当必须在生物安全柜外处理微生物时，需采取面部保护措施(跟镜、口罩、面罩、或其他防溅装置)，以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。
3、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域(如，咖啡屋、图书馆、门房)时，防护服必须留在实验室内。防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。
4、可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。戴两副手套更合适。明显污染的手套要处理，当有关传染源工作结束时或手套损伤时，要去掉手套。一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触"净"的表面(键盘、电话等)，也不应当戴着到实验室外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。
四、实验室设施(第二道屏障)
1、遏制病源的设施应该有带锁的门(见42CFR 72．6)(另发)。
2、新建实验室选址要远离公共场所。
3、每个实验室有一个洗手池。
4、实验室设计要便于清洗，实验室内不适宜用地毯。
5、实验台表面应能防水、耐热、耐有机溶剂、耐酸碱和耐用于工作台面及设施消毒的其他化学物质。
6、实验室的操作台应能承受预期的重量并符合使用要求。实验台、安全柜以及设备之间的空间应便于打扫。实验室使用的椅子及其它器具，应覆盖易于清洗的非织物。
7、安装生物安全柜时，要考虑到房间的通风和排风，不会导致生物安全柜超出正常参数运行。生物安全柜应远离门、远离能打开的窗，远离行走区，远离其他可能引起风压混乱的设备，保证生物安全柜气流参数在有效范围内。
8、应有眼睛冲洗装置。
9、光线适宜于开展所有的工作，避免反光和闪光，以免妨碍视觉。
10、没有特别的通风要求。添置新设备时，应考虑机械通风系统输送的气流不会造成实验室外部空气的循环。如果实验室有对着外面的窗子，应装防止苍蝇的窗纱。
生物安全三级(BSL-3)
BSL-3应用于临床、诊断、教学、研究、或者生产设施，在该级别中开展有关内源性和外源性病源的工作，若因暴露而吸入该病源。会引发严重的、可能致死的疾病。实验人员应在处理致病性的和可能使人致死的病源方面受过专业训练，并由对该病源工作有经验的、有资格的科学工作者监督。
所有与传染源操作有关的步骤，都在生物安全柜或其他物理遏制装置中进行，或由穿戴合适防护服及设施的实验人员进行。实验室经过特殊设计和施工。然而，应该认识到现有有些设施，不一定满足BSL-3的所有要求(即，双门进入工作区和密封问题)。在这种情况下，在BSL-2设施中开展常规操作(如，诊断程序中用于鉴定；分型、敏感性测试的病源繁殖)，其安全级别也可接受，但还需做到1)将实验室内废气排出室外；2)实验室的通风经过平衡以向室内提供定向气流；3)工作时，禁止进入实验室；4)严格遵照或使用BSL-3中推荐的标准微生物操作、特殊操作和安全设备。只有实验室主任可作出对BSL-3推荐的修订方法进行补充的决定。
以下的标准和特殊安全操作、设备及设施和BSL-3病源有关：
一、标准微生物操作
1、实验时，由实验室主任决定限制或禁止进入实验室。
2、接触传染源的人员在离开实验室取下手套后，要洗手。
3、实验室内严禁饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。实验室内戴隐型眼镜的人，也要戴眼镜和面罩。食品要存放在工作区外专用的橱柜和冰箱中。
4、不能用嘴移液，只能用机械装置移液。
5、制定锐器安全使用规范。
6、所有的操作过程应尽量细心，避免产生气溶胶。
7、至少每天一次、或有活体洒出时，对工作台面进行消毒。
8、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。来自BSL-3实验室的传染性废物转移至他处释放前应消毒。
9、实施控制昆虫和龋齿动物的程序(参见附录G)(另发)。
二、特殊操作
1、实验时，关闭实验室的门。
2、实验室主任对进入实验室进行控制，限制项目有关人员及辅助人员进入。一般情况下，易感人员或感染后会出现严重后果的人员，不允许进入实验室或动物房，例如，患有免疫缺陷或免疫抑制的人，其被感染的危险性增加。实验室主任对每种情况的估计和决定谁能进入实验室或动物房工作，负有最终责任。未成年人不得进入实验室。
3、实验室主任应制定规章和程序，只有告知潜在风险并符合进入实验室特殊要求(如，经过免疫接种)、遵守进出程序的人，才能进入实验室和动物房。
4、当实验室或遏制设施中有传染源和感染动物时，所有实验室和动物房入口处，应贴有危险警告标志和常用的生物危险符号，并显示以下信息：有关病源、实验室主任和有关责任人的姓名和电话表、进入实验室的特别要求(如，必须免疫、戴口罩、或采取其他的个人防护措施)。
5、实验室人员接受适当的、和实验室中处理或将要处理的病源有关的免疫接种或测试(如，乙肝免疫接种或TB皮试)，并建议根据所处理的病源定期进行皮试。
6、适当时，收集和储存适合于所有实验室人员和其他有风险人员使用的基本血清样品。根据所处理病源或实验室的功能，应定期收集其他血清样品。
7、实验室主任应制定实验室专用生物安全手册，标准操作程序中要包括生物安全预防措施。要告知实验人员特殊风险，实验人员要阅读，并在操作和程序中遵照执行。
8、实验人员及其辅助人员应接受适当的培训，包括和工作有关的可能存在的风险、防止暴露的必要措施和暴露评估程序。当程序必需改变时，有关人员必须每年更新知识，接受附加培训。
9、实验室主任有责任确保在涉及BSL-3的微生物工作开展之前，所有人员熟练掌握标准微生物操作及技能，熟练掌握特殊实验室设施的操作和运行，其中可能包括人致病菌或细胞培养物处理的重要技术，或由实验室主任或其他熟悉于微生物安全操作及技能的、称职的科研工作者提供的特殊培训课程。
10、必须经常对所有污染的锐器采取高度预防措施，包括针头和注射器、玻片、移液管、毛细管和手术刀。
a．针和注射器或其他锐器应限制在实验室内，类似灌肠、静脉切开放血、或实验动物液体吸出等，可以用其他器具的，就不要用锐器。可能时，用塑料器具代替玻璃器具。
b．注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器(即注射器和针头是一体的)。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。
c．适当时，使用带针头套的注射器、无针头的系统和其他安全设施。
d．打碎的玻璃器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在到掉前，应按照地方、州、联邦的规定进行消毒。
11、所有与传染源有关的开放操作，都应在遏制设施内的生物安全柜或其他物理遏制设备中进行。不许在开放的实验台上、并在开放的设施中开展工作。用背面为塑料质地的纸擦拭生物安全柜内的无孔台面，便于清洁。
12、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源洒出或溅出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。
a．洒出的传染源需由专业人员、或由经过适当培训且配有装备的处理高浓度传染源的人员进行消毒、处理、清洗。制定并公布可能造成溅洒的实验程序。
b．污染的设备，在离开设施送去修理、维护或打包运输前，要按照地方、州或联邦的规定消毒。
13、培养物、组织，体液标本，或具有潜在传染性的废物要放入容器中，以防在收集、处理、储存、运输或装卸过程中泄露。
14、实验室里所有可能被污染的废弃物品(如：手套、实验室外套等)，在丢弃或重新使用之前，必须经过消毒。15、洒漏或偶然事件中，明显或可能暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。
三、安全设备(第一道屏障)
l、进入实验室时，要穿上实验防护服，如，前襟一体或后系式大褂、干净的外套或连裤服。不得在实验室外穿防护服。重复使用的衣服在清洗前要消毒，衣服被明显污染后应更换。
2、在处理传染源、感染动物及被污染的仪器时，必须戴手套。
3、建议经常更换手套和洗手，一次性手套不能重复使用。
4、有关传染源的所有操作、感染动物的验尸、从感染动物或胚胎卵采集组织或液体等，
都应在II级或III级生物安全柜中进行(见附4)(另发)。
5、当操作不能在生物安全柜中进行时，应适当的综合使用个人防护设施(如，口罩，面罩等)和物理遏制设施(如：带安全罩或密封转头的离心机)。
6、当进入内有感染动物的房间时，应采取呼吸和面部保护措施。
四、实验室设施(第二道屏障)
1、实验室要离开建筑物内的行走区，禁止随便进入实验室。进入走道后，至少需要经过两道自动门，才能进入实验室。所有的门都应有锁(见附录F)(另发)。过道里可以设计一个更衣室。
2、每个实验室有一个洗手池，洗手池的操作应该是免接触式或全自动的，洗手池应安装在门口附近。
3、处理BSL-3病源的区域，墙面、地面、天花板应易于清洗、消毒；若有接缝，应密封；表面应光滑防水；对实验室常用化学试剂和消毒剂具有耐腐蚀性。地板应整体、防滑，建议在地板凹处使用掩蔽罩。墙面、地面、天花板都不应留有缝隙，或在设施消毒时能够密封。
4、实验台表面应能防水、耐热、耐有机溶剂、耐酸碱和用于工作台面及设施消毒的其他化学物质。
5、实验室的操作台应能承受预期的重量。实验台、安全柜以及设备间的空间便于打扫。实验室使用的椅子及其它器具，应覆盖易于清洗的非织物。
6、所有的窗门必须关闭和密封。
7、有实验垃圾处理设施及其使用方法，该设施最好设在实验室内(即，高压锅、化学消毒剂、焚烧炉、其他可行的消毒方法)。应有消毒设备使用方法。若垃圾运出实验室，应适当密封，并不应通过公共通道运送。
8、应配置生物安全柜，安全柜放置地点应远离门、房间通风百叶窗、实验室内行走区。
9、应有管道化的排气系统，该系统进入实验室的风向应从"洁净区"到"污染区"。排出的空气不再循环至建筑物内的任何其他区域。排出的空气不需要过滤或作其他处理，但也要依所处场所的要求、特殊病源操作、使用条件而定。外部排气口要远离有人区、进风口，否则需经过HEPA过滤。实验人员必须证实进入实验室的风向是正确的。建议在实验室的入口处设置可视的监视装置，表明和证实进风的风向。要考虑安装HVAC控制系统。
防止实验室持续正向增压。应安装声音报警装置，警告实验人员HVAC系统出了问题。
10、若生物安全柜至少每年经过测试和确证，则二级生物安全柜排出的、经过HEPA过滤的空气，可进入实验室循环。当二级生物安全柜通过建筑物排气系统排出空气时，安全柜的排气管路的连结，应避免对安全柜的空气平衡或建筑物排气系统的空气平衡产生干扰(如，在安全柜排气管和排气管道间形成空气隙)。当使用三级生物安全柜时，要和排气系统直接连结。若三级安全柜和供气系统相连，应避免安全柜正向增压(见附A)。
11、会产生气溶胶的连续流离心机及其他设备应在一个装置中，该装置通过HEPA过滤器排出空气，而避免直接排入实验室中。至少每年测试HEPA系统。另外，当远离有人区或进风口时，该设备排出的空气可以排到外面。
12、真空管路由液体消毒剂汽水阀和HEPA过滤器及类似设备保护。需要时，要更换过滤器。另外，可以使用手提真空泵(也需要由汽水阀和过滤器正确保护)。
13、实验室内应有眼睛冲洗装置。
14、光线适宜于开展所有的工作，避免反光和闪光，以免妨碍视觉。
15、BSL-3设施的设计和操作程序必须文件化。设施必须经过测试以确证设计和操作参数在系统运转前已达到要求。因操作经验，会修改操作程序，所以设施必须反复测试，每年至少一次。
16、若有关病源陈述(根据风险分析、场所条件、其他有关联邦/州／地方法规而定)中要求，则应采取其他环境保护措施(如，实验人员淋浴、排出空气的HEPA过滤、其他管道设施的遏制处理、液体消毒剂的供应)。
生物安全四级(BSL-4)
有些危险的外源性病源，具备因气溶胶传播而致实验室感染和导致生命危险疾病的高度个体风险，有关工作应在BSL-4实验室中开展。和BSL-4病源有相近或特定抗原关系的病源，也应在该级别中开展工作，在该级别的连续工作和低级别的工作中得到足够数据的病源除外。实验室成员应在处理特别危险的传染源方面受过特殊和全面的训练，应了解标准和特殊操作中一级和二级遏制的作用、遏制设备、实验室设计性能。实验由在有关病源方面受过训练、并有工作经验的、有资格的科学工作者监督。实验室主任严格控制进入实验室。设施应在独立的建筑物内；或在建筑物的一个控制区内，但和建筑物内的其他区域完全隔离。应制定、实施特殊设施操作手册。在设施的工作区内，所有工作应限制在三级生物安全柜中；或在二级生物安全柜中，但得使用装备生命支持系统的一体正压防护服。BSL-4实验室经过特殊设计，是一个特殊的工程，可以防止微生物向环境中扩散。
以下的标准和特殊安全操作、设备及设施和BSL-4病源有关。
一、标准微生物操作
1、实验时，由实验室主任决定限制进入实验室。
2、要制定锐器的安全使用规范。
3、所有的操作过程应尽量细心，避免产生气溶胶。
4、至少每天一次、或有活体洒出时，对工作台面进行消毒。
5、所有废物在释放前，应使用可行的方法消毒，如高压灭菌。
6、实施控制昆虫和龋齿动物的程序(参见附录G)(另发)。
二、特殊操作
l、只有在实验过程中或辅助需要而必须进入设施或独立实验室的实验人员，才能授权进入。患有免疫缺陷或免疫抑制的人，存在被感染的危险。另外，对于感染风险大的人、因感染而会致特殊危险的人，如儿童或孕妇，不准进入实验室或动物房。监督者对每种情况的估计和决定谁能进入实验室工作负有最终责任。通过安全措施(如锁上门)限制进入实验室。实验室主任、风险控制负责人、设施物理安全负责人控制人员进入。进入前，要告知潜在危险，通知采取适当安全防护以保证安全。授权进入者要执行通知规定，执行现行所有其他进出程序。所有人要作工作日志，记录每次进出日期、时间。应建立实用有效的紧急情况处理程序。
2、当实验室或动物房中有传染源和感染动物时，所有入口处的门上应贴有危险警告标志和常用的生物危险符号，并标明以下信息：有关病源、实验室主任和其他责任人的姓名表、并表明进入该区的所有特别要求(如，必须免疫或戴口罩)。
3、实验室主任有责任确保在涉及BSL-4的微生物工作开展之前，所有人员非常熟练掌握标准微生物操作及技能，熟练掌握特定实验室设施的特殊操作和运行，其中可能包括人致病菌或细胞培养物处理的重要经验，或由实验室主任或其他熟悉于独特的微生物安全操作及技能的、有资格的科研工作者提供的特殊培训课程。
4、实验室人员接受有效的、和实验室中处理或将要处理的病源有关的免疫接种。
5、适当时，收集和储存适合于所有实验室人员和其他有风险人员使用的基本血清样品。根据所处理病源或实验室的功能，应定期收集其他血清样品。决定建立血清学监督程序时，应当考虑能否得到有关病源的抗体测试方法；程序中，收集一段时间后，应进行血清样品的测试，并将测试结果通知参与者。
6、实验室主任应制定、使用生物安全手册。要告诉实验人员特殊风险，实验人员要阅读，并在操作和程序中遵照执行。
7、实验人员及其辅助人员应接受适当的培训，包括和工作有关的可能存在的风险、防止暴露的必要措施和暴露评估程序。当程序必需改变时，有关人员必须每年更新知识，接受附加培训。
8、人员只有通过更衣间和淋浴室进出实验室。每次离开实验室时，淋浴消毒。仅在紧急情况下，使用气塞进出实验室。
9、在外更衣间脱掉并保存日常衣服。所有进入实验室的人员，应有并使用整套实验服，包括内衣、紧身长衬裤和衬衫或连衣裤工作服、鞋子、手套。当离开实验室并进入淋浴区前，在内更衣间脱掉实验服。衣服清洗前高压杀菌。
10、设施中所需用品和物料通过双门高压锅、烟熏消毒舱、或气塞送入。每次使用后，要对这些装置适当消毒。双门高压锅、烟熏消毒舱、或气塞外面的门牢固的关上后，设施内的人员打开里侧的门取出物料。物料送入设施后，门上保险。
11、必须经常对所有污染的锐器采取高度预防措施，包括针头和注射器、玻片、移液管、毛细管和手术刀。
a．针和注射器或其他锐器应限制在实验室内，类似灌肠、静脉切开放血、或实验动物液体吸出等，可以用其他器具的，就不要用锐器。可能时，用塑料器具代替玻璃器具。
b．注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器(即注射器和针头是一体的)。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。
c．适当时，使用带针头套的注射器、无针头的系统和其他安全设施。
d．打碎的玻璃器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在到掉前，应按照地方、州、联邦的规定进行消毒。
12、从三级生物安全柜和BSL-4实验室转移的活的或完整的生物材料应转入不易破碎的、密封的第一级容器中，然后由不易破碎的、密封的第二级容器包裹。通过专用的杀菌浸泡罐、烟熏消毒舱、或气塞转移出设施。
13、除了需要保持活性或完整状态的生物材料外，除非在离开实验室前高压杀菌或消毒，任何材料不得转移出BSL-4实验室。可能被高温或蒸汽毁坏的设备和材料，可通过气体或烟雾的方法在专用气塞或舱中消毒。
14、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源洒出或溅出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备应当进行日常消毒。设备送去维修或保养前应消毒。
15、洒出的传染源需由适当的专业人员、或由经过适当培训且配有装备的处理高浓度传染源的人员进行处理、清洗。在实验室内，制定并公布可能造成溅洒的实验程序。
16、建立一个体系，报告实验事故、暴露、员工长期旷工以及潜在的和实验室相关的疾病的医疗监督。做好并保存书面记录。和报告-监督体系关系重大的是，得到检疫、隔离、和对潜在或已知患实验室相关疾病的人员进行治疗的设施。
17、和所进行的实验工作无关的材料(如，植物、动物和衣服)不允许带入设施。
三、安全设备(第一道屏障)
设施内的所有程序都在三级生物安全柜中进行，或者穿装备生命支持系统的一体的正压个人防护服、在二级生物安全柜中进行。
四、实验室设施(第二道屏障)
BSL-4实验室有两种模型：生物安全柜实验室，所有的病源处理均在三级生物安全柜中进行；防护服实验室，实验人员穿防护服。也可以在同一设施中，两种模型结合。若结合使用，每种模型必须符合该模型的所有要求。
(一)生物安全柜实验室(见附1)
1、BSL-4实验室为独立的建筑物或建筑物内有明确界线的独立区。设施内的房间作如下安排，至少通过两道门后，才进入有三级生物安全柜的房间(生物安全柜室)。供进出生物安全柜室用的外内更衣间通过淋浴室隔开。不能通过更衣间进入生物安全柜室的材料、用品、设备，可通过设有双门高压锅、浸泡缸、烟熏消毒舱、或通气间的遏制屏障处(用于消毒)进入。
2、实验开始前，每天检查所有的控制参数(如，气流方向)和生命支持系统，保证实验室按照其运转参数运转。
3、生物安全柜室和内更衣间的墙面、地面、天花板建成密封的内壳,以便于烟熏、防止动物和昆虫进出。地板整体密封、覆盖。内壳的内表面耐液体和化学试剂，便于该区域清洁和消毒。有关结构和表面的所有裂缝均密封。进入生物安全柜室和内更衣间的门框尽量小、能密封，便于消毒。生物安全柜室地板上的任何排水管直接通入废液消毒系统
中。下水道开口和其他管道含有HEPA过滤器，防止动物。
4、实验台表面一体或密封，防水、耐热、耐有机溶剂、耐酸碱和用于工作台面及设施消毒的其他化学物质。
5、实验室的操作台开口结构简单，能承受预期的重量并符合使用要求。实验台、安全柜以及设备之间的空间应便于打扫、消毒。实验室使用的椅子及其它器具，应覆盖易于消毒的非织物。
6、有免接触式或全自动操作的洗手池，洗手池应安装在生物安全柜室和外内更衣间的门附近。
7、若有中央真空系统，生物安全柜室外的区域不需要抽真空。在线的HEPA过滤器应安装在离使用点和供应阀尽可能近的地方。过滤器的安装要便于就地消毒和更换。生物安全柜室的其他液体和气体供应系统，应有防回流装置保护。
8、若有喷水池，应设在实验室外的走道里，自动或脚动操作。喷水池的供水系统和实验室区域的供水系统分开，设防回流保护器。
9、进入实验室的门可自动关闭，并且可锁。
10、任何窗户不会打破，并密封。
11、对于传递出三级生物安全柜和生物安全柜室的需要消毒的物料，备有双门高压锅。向遏制屏障外开口的高压锅必须密封在遏制屏障的墙上。高压锅门自动控制，使得向外的门只有在高压灭菌过程完成后，才能打开。
12、具备通过浸泡缸、烟熏消毒舱消毒、或类似的消毒手段，使得不能在高压锅中消毒的物料和设备，能安全地从三级生物安全柜和生物安全柜室中转出。
13、污染的内更衣间(包括厕所)和生物安全柜室中的洗手池、地面排水管(若使用)、高压舱、其他来源的液流，通过可行的方法消毒(最好是热处理)后，才能排入污水管中。来自淋浴室、无污染厕所的液流，可不经过处理而排入污水管中。用于废液消毒的程序，必须在物理上和生物上均有效。
14、设有明确的非循环的通风系统，平衡系统的供风和排风装置，保证气流方向从小危险区到潜在的大危险区。能对相邻区之间各自的气压／气流方向监视并报警，以指明系统故障。在无污染的更衣间入口处设有适当的气压可视监视装置，表明、证实各生物安全柜室的气压。监视供气和排气装置气流，HVAC控制系统可避免实验室持续正向增压。三级生物安全柜应直接接入排气系统。若三级安全柜和供气系统相连，应避免安全柜正向增压。
15、生物安全柜室、内更衣间、通气间的供气和排气通过HEPA过滤器。在空气入口处进气，从所用空间排气。HEPA过滤器离供应源应尽可能近，以减少可能污染的管道长度。所有HEPA过滤器需要每年测试和确证。HEPA过滤器装置，应适于过滤器取下前就地消毒，或可将过滤器转入密封、不漏气的一级容器中，然后消毒和／或焚毁。HEPA过滤器装置的设计应适于过滤器的安装、起作用。使用预先确证的HEPA过滤器是有利的。排气HEP A过滤器的使用寿命，可以因对供气适当预过滤而延长。
16、BSL-4设施的设计和操作程序必须文件化。设施必须经过测试以确证设计和操作参数在系统运转前已达到要求。因操作经验，会修改操作程序，所以设施必须每年确证。
17、实验室和外部应有适当的通讯系统(如，传声器、传真、计算机)。
(二)、防护服实验室
1、BSL-4实验室为独立的建筑物或建筑物内有明确界线的独立区。设施内的房间作如下安排，通过更农区和消毒区，进入开展有关BSL-4病源工作的房间(防护服实验室)。供进出防护服实验室用的外内更衣间通过淋浴室隔开。在设施内保持一个特殊设计的防护服区，为实验人员提供类似于三级生物安全柜的保护。进入该区的人员，穿一体正压防护服，防护服装备生命支持系统，通过HEPA过滤供应空气。生命支持系统包括充足的呼吸空气压缩罐、报警器、紧急备用呼吸空气罐。通过装于空气密封门上的气塞进入该区。工作人员离开该区前，用消毒剂淋浴对防护服表面消毒。可自动启动应急供电，至少保证排气系统、生命支持系统、报警、灯光、进出控制、和生物安全柜运转。对于周围实验室；防护服内的气压是正的。相对于相邻区域，防护服区内的气压是负的。备有应急光源和通讯系统。防护服实验区、消毒剂淋浴区、气塞的内壳的所有缝隙都密封。
2、实验开始前，每天检查所有的控制参数(如，气流方向、消毒剂淋浴)和生命支持系统，保证实验室按照其运转参数运转。
3、对于传递出防护服实验室的需要消毒的废料，可使用遏制屏障上的双门高压锅。向防护服实验区外面开的高压锅门，必须密封在防护服实验区的外墙上，门自动控制，使得外面的门只有在高压灭菌过程完成后，才能打开。配备用于消毒的浸泡缸、烟熏消毒舱、或通气气塞，以传入不能通过更衣间进入防护服区的物料、用品、设备。这些装置也可用于不能高压消毒的物料、用品、设备从实验室安全传出。
4、防护服区的墙面、地面、天花板建成密封的内壳，以便于烟熏、防止动物和昆虫(见附G)。内壳的内表面耐液体和化学试剂，便于该区域清洁和消毒。有关结构及表面的所有的裂缝均密封。防护服区地板上的排水管设有存水弯，内有对目标病源显效的化学消毒剂，并和废液消毒系统直接相连。下水道开口和其他管道合有HEPA过滤器。
5、防护服区的内部设施配件，如灯固定器、通气管道、公用管道的安装，应尽量减少水平表面积。
6、实验台表面；体，防水、耐热、耐有机溶剂、耐酸碱和用于工作台面及设备消毒的化学物质。
7、实验室的操作台开口结构简单，能承受预期的重量并符合使用要求。实验台、安全柜以及设备之间的空间应便于清洁、消毒。实验室使用的椅子及其它器具，应覆盖易于消毒的非织物。
8、防护服区设有免接触式或全自动操作的洗手池。应风险评估要求，外内更衣间应有洗手池。
9、若有中央真空系统，防护服区外的区域不需要抽真空。在线的HEPA过滤器应安装在离使用点和供应阀尽可能近的地方。过滤器的安装要便于就地消毒和更换。防护服区其他液体和气体供应系统，应有防回流装置。
10、进入实验室的门可自动关闭，并且可锁。消毒剂淋浴室的内外门和气塞的内外门互锁，防止两房间的门同时打开。
11、任何窗户不会打破，并密封。
12、洗手池、地面排水管(若使用)、高压舱、和遏制屏障内其他来源的液流，通过可行的方法消毒(最好是热处理)后，才能排入污水管中。来自淋浴室、厕所的液流，可不经过处理而排入污水管中。用于废液消毒的程序，必须在物理上和生物上均有效。
13、设有明确的非循环的通风系统，平衡系统的供风和排风装置，保证气流方向从小危险区到潜在的大危险区。建议有备用供气扇，要求有备用排气扇。能对相邻区之间各自的气压／气流方向监视并报警，以指明系统故障。在无污染的更衣间入口处设有适当的气压可视监视装置，表明、证实各防护服区的气压。监视供气和排气装置气流，HVAC控制系统可以避免实验室持续正向增压。
14、防护服区、消毒淋浴间、消毒气塞的供气通过HEPA过滤器。来自防护服区、消毒淋浴间、消毒气塞的普通房间排气，通过两个排列的HEPA过滤器处理，然后向外释放。在空气入口处进气，从所用空间排气。HEPA过滤器离供应源应尽可能近，以减少可能污染的管道长度。所有HEPA过滤器需要每年测试和确证。HEPA过滤器装置，应适于过滤器取下前就地消毒，或可将过滤器转入密封、不漏气的一级容器中，然后消毒和／或焚毁。H
EPA过滤器装置的设计应适于过滤器的安装、起作用。使用预先确证的HEPA过滤器是有利的。排气HEPA过滤器的使用寿命，可以因对供气适当预过滤而延长。
15、供气和排气点的布置，应当以减少防护服房间内通气空间死角为原则。
16、在穿正压防护服工作人员工作的设施内，经过处理的、来自二级生物安全柜的空气，可以释放到房间中或通过设施的排气系统向外排放。若通过设施排气系统向外排放处理后的空气，在和排气系统连接时，应考虑避免干扰生物安全柜或设施排气系统的空气平衡。
17、BSL-4设施的设计和操作程序必须文件化。设施必须经过测试以确证设计和操作参数在系统运转前已达到要求。因操作经验，会修改操作程序，所以设施必须每年确证。
18、实验室和外部应有适当的通讯系统。
生物安全实验室分级美国国立卫生研究所 美国疾病管理中心 病源 操作 一级屏障 二级屏障
P1 BSL-1 不会经常引发健康成人疾病 标准的微生物操作 不要求 开放实验台、洗手池
P2　BSL-2　　人类病源菌，因皮肤伤口、吸入、黏膜曝露而发生危险　 BSL-1操作加：1、限制进入2、有生物危险警告标志3、"锐器"安全措施4、生物安全手册，其中规定废物消毒和医疗观察 1级、2级生物安全柜　实验服、手套、若需要则采取面部保护措施 BSL-1加：高压灭菌锅P3 BSL-3 内源性和外源性病源，可通过气溶胶传播，能导致严重后果或生命危险 BSL-2操作加：1、控制进入2、所有废物消毒3、洗涤前，实验服消毒4、有基础血清 1级、2级生物安全柜保护性实验服、手套、若需要则采取呼吸保护措施 BSL-2加：1、和进入走廊隔开2、双门进入，门自动关闭3、排出的空气不循环4、实验室内负压4 BSL-4 对生命有高度危险的危险性病源或外源性病源：致命、通过气溶胶而致实验室感染：或未知传播风险的有关病源 BSL-3操作加：1、进入前换衣服2、出实验室前淋浴3、带出设施的所有材料消毒 3级生物安全柜或1级、2级生物安全柜加全身、供应空气、正压防护服 BSL-3加：1、单独建筑或隔离区域2、有供气系统、排气系统、真空系统、消毒系统3、其他有关要求。